细胞冻存融化的原则是缓冻速融细胞冻存（慢）
1.预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存预冷；
2.用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基，PBS冲洗两次，用胰酶消化细胞（尽可能温和）；
3.将预冷的冻存液悬浮细胞，用滴管轻轻吹打混匀。
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液，密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力，如果有程序降温器（放在-80℃冰箱一整夜，放入液氮罐）；或者可以在4℃，2h；然后转到-20℃，2h；-80℃，2h；放入液氮罐。
细胞冻存管融化（快）
1.将细胞冻存管取出，浸入37℃水浴锅内，轻轻晃动，注意融化，当融得只剩一个小冰块时，将细胞插入冰中。
2.加入4℃预冷的培养基，用手指轻弹悬浮细胞团。
3.250g离心10min，去除上清液，再加入培养基，轻轻悬浮。
4.尽量将细胞中的DMSO洗去，计数。
在细胞冻存过程中，所结的冰晶对细胞伤害较大，所以过程一定要慢，DMSO能减少冰晶伤害。
在细胞复苏过程中，要快，以减少融化对细胞的伤害，其实还是冰晶的问题。DMSO浸润的细胞非常脆弱，所以可要尽快将DMSO去除，一定要轻。
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